المحتوى
Lise هي كلمة يونانية وتعني ببساطة "تقسيم" أو "تحلل". إنه وصف جيد للتفاعل الذي يحدث مع الخلايا في محلول تحلل ، وهو محلول يفككها لاستخراج محتواها. يستخدم العلماء هذه الحلول لاستخراج الحمض النووي أو البروتينات في تحليل الخلايا ، خاصة في حالة البكتيريا. يختلف نوع المخزن المؤقت لتحلل الخلايا باختلاف نوع التجربة ، ومع ذلك سنذكر بعض الخيارات الشائعة.
عازلة وملح
تعمل المحاليل العازلة على تثبيت الأس الهيدروجيني ، بينما تخضع الخلايا لعملية التحلل. يعتبر محلول tris-HCL هو المخزن المؤقت الأكثر شيوعًا للتخزين المؤقت عند درجة الحموضة 8 ، إذا كان الرقم الهيدروجيني مطلوبًا. HEPES هو محلول عازل شائع آخر في هذه التجارب. يمكن أيضًا إضافة كلوريد الصوديوم لزيادة القوة الأيونية ، والتركيز الكلي للمواد المذابة خارج الخلايا. هذا الأخير مهم لأن الماء يمكن أن ينتشر إلى جميع أغشية الخلايا ، من المناطق ذات التركيز المنخفض للذوبان إلى تلك ذات التركيز العالي.
منظف
المنظف هو المكون الرئيسي الذي يذيب غشاء الخلية بحيث يمكن للمحتويات الهروب. المنظفات عبارة عن جزيئات أمفيباثيك ، أي بنهاية تتفاعل بسهولة مع جزيئات الماء في حين أن الطرف الآخر الكارهة للماء ، أو "الذي يخاف من الماء" ، لا يقوم بهذا التفاعل. يمكنهم إذابة الدهون عن طريق تكوين المذيلات ، مجموعات صغيرة ، حيث تتجه الذيل الكارهة للماء لجزيئات المنظف إلى الداخل إلى جزيئات الدهون. المنظفات الشائعة هي كبريتات دوديسيل الصوديوم أو SDS و NP-40 و tritonX.
عوامل مخلبية ومثبطات
عادةً ما تحتوي مخازن التحلل أيضًا على عوامل مخلبية مثل حمض الإيثيلين ديامينيتتراسيتيك (EDTA) أو حمض تتراسيتيك الريتيلين جليكول (EGTA). ترتبط هذه المواد الكيميائية بأيونات المعادن بشحنة +2 (على سبيل المثال ، المغنيسيوم والكالسيوم) ، مما يجعلها غير متاحة للتفاعلات الأخرى. تحتاج العديد من الحمض النووي (البروتينات التي تمضغ الحمض النووي) والبروتياز (البروتينات التي تقطع البروتينات الأخرى) إلى أيونات المغنيسيوم للعمل ، لذلك من خلال حرمانها من هذا المكون الرئيسي ، EDTA و EGTA ، فإنها تساعد في تقليل مستوى البروتياز أو من نشاط DNAse. ومع ذلك ، فهي لا تستبعدها تمامًا ، ولا تعتمد بعض البروتياز على عوامل مساعدة للمغنيسيوم ، لذلك تحتوي مخازن التحلل أحيانًا أيضًا على مواد تسمى مثبطات الأنزيم البروتيني ، والتي ترتبط بها وتمنعها من العمل بشكل صحيح.
تحلل قلوي
التحلل القلوي هو تقنية شائعة جدًا لتنقية البلازميدات من البكتيريا. هذه الطريقة تعني استخدام ثلاثة حلول. الأول يحتوي على الجلوكوز ، المخزن المؤقت tris-HCL ، EDTA و RNAses. ينتج الجلوكوز تركيزًا عاليًا من البكتيريا الخارجية المذابة ، بحيث تصبح مترهلة قليلاً ، مما يسهل عملية التحلل. يعمل EDTA و tris-HCL كما هو موضح سابقًا ، بينما يمضغ RNAse أي RNA داخل الخلية لإبعاده عن الطريق. الحل الثاني فعال في تحلل الخلايا. يحتوي على المنظفات SDS و NaOH ، مما يرفع درجة الحموضة إلى 12 أو أعلى ، مما يؤدي إلى تغيير طبيعة البروتينات داخل الخلية وتسبب في فصل الحمض النووي إلى خيوط بسيطة. يحتوي المحلول الثالث على أسيتات البوتاسيوم لإعادة درجة الحموضة إلى مستوى أكثر حيادية ، بحيث يمكن أن تتجمع خيوط DNA البلازميدية معًا. وفي الوقت نفسه ، تتجمع البروتينات المشوهة وتتراكم ، بينما تنضم أيونات كبريتات الدوديسيل مع أيونات البوتاسيوم لتشكيل مركب غير قابل للذوبان ، والذي يمكن أن يترسب أيضًا من المحلول.