المحتوى
- الكشف باستخدام تغييرات اللون
- باستخدام قارئ ELISA للقياس
- ELISA تنافسية مباشرة (cytochrome c)
- احتضان الأجسام المضادة الأولية في الأنابيب
اختبار ELISA هو اختبار ماص مناعي مرتبط بالإنزيم يستخدم أجسام مضادة أو مستضدات مقرونة بإنزيم معين للمساعدة في تحديد تركيز الجسم المضاد أو المستضد. إذا كنت تأخذ ELISA ولا يمكنك استخدام أجسام مضادة محددة للحصول على نتائجك ، يُقترح ELISA التنافسي لأنه يستخدم مستضدًا مترافقًا مع إنزيم بدلاً من الجسم المضاد وطريقة اكتشاف مختلفة.
الكشف باستخدام تغييرات اللون
بروتوكول شائع لـ ELISA التنافسي هو استخدام جسم مضاد أولي غير مُعلَن ومنقى. يغطى الجسم المضاد آبار صفيحة microtiter ويتم تحضينه بمعايير غير معروفة. ثم يضاف مناعي إلى الاقتران مع الجسم المضاد الأولي ، والذي يرتبط بمواقع الجسم المضاد التي لم تشغل بعد. ثم يتم استخدام الركيزة لإنشاء تغيير لون لقياس تركيز الربط.
باستخدام قارئ ELISA للقياس
استخدام لوحة البوليسترين microtitre وإضافة الجسم المضاد الأساسي إلى كل بئر. لتحقيق أقصى قدر من الربط ، ملء البئر مع ميكروغرام واحد من الأجسام المضادة. احتضان لوحة لمدة أربع ساعات في درجة حرارة الغرفة. إضافة الأجسام المضادة التقاط الأساسي وغسل الآبار مع PBS (الفوسفات مخزنة المالحة). احتضان لوحات مع عازلة حظر لمدة ساعتين في درجة حرارة الغرفة. غسل الآبار مرتين مرة أخرى مع برنامج تلفزيوني وإضافة المعايير. ضع محلول مستضد المضاد في الآبار واحتضان مرة أخرى لمدة ساعتين. غسل اللوحة مرة أخرى مع برنامج تلفزيوني أربع مرات. أضف الركيزة وقياس الكثافة في الطول الموجي المحدد باستخدام قارئ ELISA.
ELISA تنافسية مباشرة (cytochrome c)
للحصول على ELISA تنافسية مباشرة ، يجب إجراء تحليل لتخفيف المصل للمستضد الذي تستخدمه في التجربة. ثم يتم طلاء لوحة microtiter مع السيتوكروم و حضنت بين عشية وضحاها. ثم يتم تنفيذ جزء ELISA من الفحص بإضافة كتلة الكاشف والأجسام المضادة الثانوية. تتم قراءة نتائج الامتصاصية باستخدام قارئ microplate.
احتضان الأجسام المضادة الأولية في الأنابيب
في هذا الإجراء ، يتم تحضين الجسم المضاد الأساسي في أنابيب الاختبار التي يرتبط فيها مولد الضد ذي الاهتمام به. ثم تضاف العينات إلى آبار لوحات microtiter واحتضانها. ثم يتم غسل الآبار لإزالة أي معقدات الأجسام المضادة للمستضد غير المرتبطة ، ثم يضاف محلول الحجب لمنع ربط الأجسام المضادة الثانية بالآبار. ثم يتم قراءة الجسم المضاد الثانوي على قارئ لوحة للحصول على النتائج.