المحتوى
يستخدم حساء المغذيات في زراعة البكتيريا ، مثل الإشريكية القولونية. تختلف وصفات هذه المرق باختلاف الأنواع البكتيرية ، وكذلك وجود تعديلات وراثية ، مثل مقاومة المضادات الحيوية ، على سبيل المثال. يمكن ترسيخ المرق بإضافة أجار أجار ، والذي يسمح للبكتيريا بتكوين مستعمرات متميزة ، في حين أنها في المستنبتات السائلة تنتشر ببساطة عبر الحجم. هذا هو الأسلوب الأساسي ، لكنه ضروري للطرق المتقدمة مثل استنساخ الجينات أو المقايسات الميكروبيولوجية. تفترض هذه الورقة أن السلالات المختبرية من الإشريكية القولونية سيتم استزراعها في أطباق آجار مرق لوريا (أو أطباق بتري).
الاتجاهات
-
قياس 10 غرام من التربتون البكتيرية ، 5 غرامات من خلاصة الخميرة ، 5 غرامات من كلوريد الصوديوم ، 15 غراما من أجار أو agarose و 1 مل من هيدروكسيد الصوديوم 1N. امزجها مع كمية معقمة ومعقمة من الماء المقطر حتى يتم الحصول على لتر واحد من المتوسط. الأوتوكلاف المتوسطة في زجاجات أو قوارير نصف توج لمدة 25 دقيقة. اتركها لتبرد إلى حوالي 50 درجة مئوية قبل إضافة الكواشف التي يمكن أن تدمرها الحرارة العالية ، مثل المضادات الحيوية أو المكملات الغذائية الأخرى.
-
اترك الوسيط المعقم لتبرد إلى 50 درجة مئوية ولا تقل عن 45 درجة مئوية ، حيث سيتمسك الأجار بالحاوية قبل سكبها. احصل على أطباق بتري المعقمة وسكب ما يكفي لتغطية مساحة السطح بالكامل ونصف عمقها على الأقل. تجنب الإفراط في التعبئة ، ويفضل ألا تدع الآغار يصل إلى الحافة العلوية للوحة. انتظر التصلب في بيئة معقمة (على سبيل المثال ، تحت حجرة التدفق الصفحي) ، وترك الأغطية مفتوحة وزاوية واحدة من غطاء محرك السيارة.
-
تجفيف لوحات. على الرغم من أنه يمكن استخدامها بمجرد أن تكون صلبة ، إلا أن بعض الرطوبة سوف تكون موجودة على سطح الأجار ، مما سيمنع مستعمرات البكتيريا من الالتصاق بما فيه الكفاية. لذلك من الأفضل تجفيف الأطباق قبل استخدام أي بكتيريا ، على سبيل المثال عن طريق تركها في درجة حرارة الغرفة لبضعة أيام أو لمدة نصف ساعة تحت حجرة التدفق الصفحي أو في حاضنة 37 درجة مئوية.
-
تخزين لوحات. يجب تكديس اللوحات المجففة رأسًا على عقب (مقلوبة) وإعادة إدخالها في عبواتها الأصلية ، ومختومة بالشريط وملفوفة بورقان لحمايتها من الضوء ، أو في حاوية مناسبة. احرص دائمًا على كتابة تاريخ الإعداد وتجنب الاستخدام إذا كانت اللوحات أكثر من شهرين.
نصائح
- قم بتنفيذ أكبر عدد من الخطوات السابقة (يفضل أن تكون الكل) في بيئة معقمة (على سبيل المثال ، تحت غطاء تدفق اللهب أو غطاء رقائقي) لمنع الملوثات البكتيرية المحمولة جواً من الدخول والنمو في الوسط.
ما تحتاجه
- 10 غرام من تريبتون البكتيريا
- 5 غرامات من مستخلص الخميرة
- 5 غرامات من كلوريد الصوديوم
- 1 ملليلتر من 1N هيدروكسيد الصوديوم
- 15 غراما من أجار أو agarose
- المكملات الغذائية ، مثل المضادات الحيوية أو galactosides
- الأوتوكلاف
- الأواني الزجاجية المختبرية
- لوحات بتري
- تدفق الصفحي
- بنسن فوهة
- الأوتوكلاف والمواد الاستهلاكية
- المقاييس والمنتجات الاستهلاكية