المحتوى
يتكون جل الاغاروز من العلماء الذين يعملون في مختبرات البيولوجيا الجزيئية لدراسة شظايا الحمض النووي التي يتم تعديلها أثناء العمل التجريبي. تقنية صنع agarose gel هي مهارة روتينية أساسية يجب أن يتقنها جميع الباحثين لأنها تتيح التصور المباشر لأحجام مختلفة من الحمض النووي للتحقق من مشاريع استنساخ الجينات. على الرغم من أن تحضير الجل ليس أمرًا صعبًا ، كما هو الحال في جميع الإجراءات المختبرية ، إلا أنه يجب تجربته فقط بواسطة محترف تم تدريبه بشكل علمي بسبب المخاطر البيولوجية.
الاتجاهات
-
تأكد من عدم وجود تشققات في قواعد الجل أو أي شيء يمكن أن يتسبب في تسرب agarose الساخن. نظف الصواني بنسبة 70٪ من الكحول واتركها حتى تجف تمامًا. القاعدة لها نهايتان مفتوحتان ونهايتان مغلقتان. في بعض التنسيقات ، يتم توفير القصاصات معهم من أجل إغلاق النهايات ، ولكن يجب إغلاق معظمها عن طريق وضع شرائط الشريط بين الأجزاء المفتوحة. اضغط على الشريط بإحكام وأمان ، حيث قد يتحرك بعيدًا عن الحامل ويسمح للغروز الساخن بالتسرب.
-
بناءً على حجم جزء الحمض النووي الواجب فصله وتحليله على جل الاغاروز ، حدد النسبة المئوية اللازمة. على سبيل المثال ، عند 1٪ (w / v) ، سيكون جل agarose فعالًا لتحليل 0.5 إلى 10 كيلو بايت من مقاطع DNA. كل ما ارتفعت النسبة المئوية (agarose أكثر) ، كانت الشظايا التي يمكن فصلها أصغر. التجارب الروتينية تستخدم مجموعة من 0.5 ٪ إلى 2 ٪ الاغاروز. بالنسبة لغل الاغاروز 1 ٪ ، تزن 1 غرام من مسحوق الاغاروز في خلع الملابس الكيميائية أو غيرها من نظام الاحتواء. نقل بعناية إلى منطقة إعداد مختبر للهلام.
-
في منطقة إعداد هلام المناسبة ، وقياس 100 مل من العازلة الكهربائي. يجب أن يكون في درجة حرارة الغرفة. نقل مسحوق agarose إلى قارورة مقاومة للحريق وسكب حجم المخزن المؤقت لل الكهربائي. سخني المزيج برفق في فرن الميكروويف ، لكن لا تغليه ، لأن التبخر يمكن أن يغير النسبة المئوية لحاضر الاغاروز. تأكد من إذابة جميع agarose ، قم بالاهتزاز حتى تمتزج جيدًا ، واتركه يبرد قليلاً ثم أضف 0.5 ميكروغرام لكل مليلتر من بروميد الإيثيديوم. لا تتنفس أي بخار لأن هذا قد يهيج الرئتين والأنسجة المخاطية. أيضا ، لا تسخين الحل بعد إضافة بروميد الإيثيديوم. رج العبوة مرة أخرى لخلطها ، ثم لا يزال المحلول ساخنًا بدرجة كافية ليتم إسكبه ، قم بصرفه في القاعدة المعدة. لاحظ أنه في حالة وجود كمية كبيرة من العينة أو تركيز قليل من الحمض النووي ، قد يتم صنع هلام أكثر سمكا. ومع ذلك ، فإن المواد الهلامية الدقيقة أسهل في التحليل لأنه سيتم تصويرها بشكل أوضح.
-
أدخل الأمشاط في الجل لإنشاء أخاديد أو آبار لتوضع العينة. اتركها لتبرد لدرجة حرارة الغرفة لعدة ساعات أو في الثلاجة لبضع دقائق. في الحالة الأخيرة ، بمجرد أن يصبح الجل جاهزًا ، يجب ملاحظة وجود بلورات الاغاروز. عمومًا ، يختفون إذا تم السماح للهلام بالتسخين إلى درجة حرارة الغرفة على سطح العمل لبضع دقائق قبل الاستخدام. قم بإزالة الأمشاط بعناية حتى لا تمزق الجل أو تكسر الآبار. جل الاغاروز جاهز الآن للاستخدام. إذا لم يتم استخدامها على الفور ، فسوف تحتاج إلى لفها في السيلوفان أو تخزينها في حاوية بلاستيكية في الثلاجة لمنعها من الجفاف أو الذوبان.
إعداد هلام الاغاروز
تحذير
- الكواشف المستخدمة عبارة عن مواد مسرطنة محتملة ويجب التعامل معها بحذر وحماية كافية. إذا تم ارتكاب خطأ أثناء تحضير الجل ، فلا يجب إعادة تسخينه أبدًا ، بل يجب التخلص منه وإعداد هلام جديد مرة أخرى.
ما تحتاجه
- مسحوق Agarose الكهربائي
- TAE أو TBE العازلة
- محلول بروميد الإيثيديوم
- قاعدة هلام
- مقاطع الشريط أو هلام الأساس
- أمشاط جل
- المقاييس والمواد الاستهلاكية
- الإيثانول
- المناشف المخبرية
- معدات الحماية الشخصية