المحتوى
يعد الاغاروز الكهربائي الكهربائي إجراءً علميًا يستخدم في مشاريع البحث والتشخيص التي تتضمن دراسة الأحماض النووية. إنه يسمح للعالم أو الفني بفصل جزيئات الحمض النووي المشحونة ، مثل الحمض النووي ، وفقًا لحجمها ، ويستخدم لتحليل المنتجات الناتجة عن التجربة ، مثل تفاعل سلسلة البوليميريز. يتم استخدامه بشكل روتيني لأنه غير مكلف للتشغيل وعملية سريعة ويسمح باسترداد الحمض النووي الجاري تحليله.
صنع الجل
جمع جميع العناصر اللازمة وتنظيفها مع 70 ٪ من الإيثانول. تشتمل العناصر على صينية صب جل ، شريط لاصق ، agarose بدرجة المختبر ، قوارير أو أسطوانات ، تركيز 10 × (Tris-Borate-EDTA ، TBE) يعمل مؤقتًا ، بروميد إيثيديوم ، صبغ ، والعينة المطلوب تحليلها. تأكد أيضًا من وجود خزان للهلام الكهربائي ومصدر للطاقة. يتم إعداد Agarose عن طريق وزن الكمية المناسبة من شريط الحمض النووي المراد تحليله ، وخلطه مع المخزن المؤقت TBE والذوبان في الميكروويف. بشكل عام ، حل 1 ٪ إلى 2 ٪ يكفي لتغطية العديد من فروع الحمض النووي التي تمت دراستها في البيولوجيا الجزيئية اليومية. الحمض النووي الصغير يحتاج إلى المزيد من المواد الهلامية المركزة ، بينما الحمض النووي الأكبر يتطلب المزيد من المواد الهلامية المخففة يخلط محلول الاغاروز مع بروميد الايثيدوم ، والذي يرتبط بالحامض النووي خلال عملية الرحلان الكهربائي. يسكب هذا المحلول في صينية الصهر الخاصة بالهلام ، تمامًا عند إدخال مشط صب ، ويترك الخليط ليصلب.
أدخل وتفعيل هلام
تتم إزالة الجل من الدرج وتغمره في خزان الكهربي هلام تحتوي على عازلة المدى. يتم خلط العينات المراد تحليلها بالأصباغ وتوضع في آبار في الجل الذي تم إنشاؤه بواسطة المشط. يتم أيضًا تضمين علامة أو مقياس للسماح للباحث برؤية تقدم الكهربائي وتحديد حجم الأجزاء المتولدة. ثم يطبق تيار كهربائي على الجل ، مما يجبر العينة على الانتقال من أحد طرفي الجل إلى الطرف الآخر. خلال هذه العملية ، تنفصل الأحماض النووية في العينة إلى أجزاء من أحجام مختلفة ، مع اقتراب الجزيئات الكبيرة من البئر ، وانتقل الجزيئات الأصغر إلى الطرف الآخر من الجل.
تحليل الجل
بعد إنهاء الإجراء الكهربائي ، تتم إزالة الجل من الخزان ووضعه في جهاز نقل الأشعة فوق البنفسجية ، الذي ينير شظايا الحمض النووي التي ترتبط ببروميد الإيثيديوم الفلوري. يتم إجراء صورة لهذا ويمكن قياس نطاقات الأحماض النووية وفقًا للمسافة التي تم ترحيلها عبر الجل. سيفصل المقياس بينهما إلى نطاقات من الأحجام المعروفة ، ويمكن استخدامه لتوجيه الباحث أثناء التحليل.